Під час фарбування мазка з харкотиння хворого з підозрою на крупозну пневмонію були використані наступні барвники і реактиви: розчин генціанвіолету, розчин Люголя, 96° спирт, водний фуксин. Який спосіб фарбування застосований у даному випадку?

Чому це правильна відповідь

Метод фарбування за Грамом є класичним диференційним способом, що дозволяє розділити бактерії на грампозитивні та грамнегативні залежно від будови клітинної стінки. Процес включає послідовне застосування основного барвника генціанвіолету, який утворює комплекс з йодом Люголя, фіксуючи забарвлення в пептидоглікановому шарі, далі знебарвлення 96% спиртом, що видаляє комплекс з тонкої пептидогліканової стінки грамнегативних бактерій, та додаткове фарбування розведеним водним фуксином для візуалізації знебарвлених клітин. Грампозитивні бактерії залишаються фіолетовими, грамнегативні набувають рожевого кольору. Цей метод широко застосовується для первинної орієнтації в мазках з клінічного матеріалу, зокрема харкотиння при підозрі на пневмонію. У випадку крупозної пневмонії основним збудником є Streptococcus pneumoniae — грампозитивний дипломокок ланцетоподібної форми з полісахаридною капсулою, що не утворює спор і має пілі для адгезії. Фактори патогенності включають капсулу, яка перешкоджає фагоцитозу, пневмолізин як цитотоксин з гемолітичною активністю та ферменти, такі як нейрамінідаза. Патогенез захворювання починається з інгаляційного проникнення збудника в альвеоли, адгезії до епітелію, розмноження з масивним запаленням, ексудацією фібрину та формуванням консолідації легеневої тканини. Імунна відповідь включає вроджений імунітет з активацією альвеолярних макрофагів та гуморальний з антитілами до капсульних полісахаридів. Діагностика крупозної пневмонії включає мікроскопію мазка харкотиння, забарвленого за Грамом, де виявляються численні грампозитивні ланцетоподібні диплококи, оточені нейтрофілами, що є ключовою ознакою для диференціації від інших пневмоній. Культуральне дослідження на кров'яному агарі показує α-гемоліз та чутливість до оптихіну. Серологічні методи та ПЛР застосовуються для підтвердження, але первинна орієнтація базується на фарбуванні за Грамом. Імунітет гуморальний, спрямований проти капсульних антигенів, післяінфекційний нестійкий, існують полісахаридні та кон'юговані вакцини для профілактики. Саме використання послідовно генціанвіолету, розчину Люголя, спирту для знебарвлення та водного фуксину прямо вказує на метод Грама, оскільки ця комбінація реактивів є унікальною для диференціації за структурою клітинної стінки. Це безпосередньо пов'язано з необхідністю швидкої орієнтації в етіології пневмонії, де грампозитивні диплококи Streptococcus pneumoniae домінують у мазку. Метод чітко відрізняється від кислотостійкого фарбування Циля-Нільсена чи інших, що не включають знебарвлення спиртом та йодний комплекс.